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Recordemos que los objetivos fundamentales de nuestra propuesta terapéutica en relación con el envejecimiento cutáneo y sus estigmas generales van a ser:

1. Activar al fibroblasto > BIOESTIMULACION
2. Procurar la disponibilidad de precursores biológicos para la construcción de la dermis y fundamentalmente de la matriz intercelular
3. Calentar fisiológicamente los tejidos a tratar
4. Y, en cualquier caso, mantener el pH fisiológico tisular y un nivel adecuado de radicales libres

Partiendo de los trabajos y consideraciones de varios autores, sabemos que los factores de crecimiento (GF) son pequeños fragmentos proteicos biológicamente activos que pertenecen al grupo de las citoquinas; y que las citoquinas se unen a los receptores de membrana para activar (o inhibir, si corresponde) las funciones celulares, determinando regeneración o desarrollo celular específico del tejido en el que se ubican. Algunos autores hablan de "agentes señalizadores".

Existen factores de crecimiento propiamente dichos y factores de transformación.

• Factores de crecimiento propiamente dichos (GF)
  Son los xGF, siendo x la indicación de la célula o tejido donde actúan.
  Por ejemplo: PDGF (derivado de plaquetas), EGF (epidérmico), VEGF (vascular endotelial), IGF (insulínico), FGF (fibroblástico básico) y HGF (hepatocítico)
  
  
• Factores de transformación (TGF)
  TGF alfa: factores positivos que transforman el crecimiento celular, aumentándolo.
  TGF beta: factores negativos que transforman el crecimiento celular, inhibiéndolo.

Los factores de crecimiento son mediadores biológicos que regulan funciones esenciales en la regeneración/reparación tisular: quimiotaxis (capacidad de producir migración celular dirigida: atraer células); mitosis (división celular); angiogénesis; proliferación, diferenciación y modulación celular; síntesis de matriz EC. Resultando evidente en ellos una actividad terapéutica que debemos y podemos utilizar.

Los pueden producir y almacenar múltiples células y tejidos: plaquetas, fibroblastos, osteoblastos, riñón, glándulas salivares, glándulas lagrimales, etc.

Intervienen en la comunicación intercelular, informando a la célula:

• de su ubicación en un momento dado
• de las células que la rodean
• de lo que se supone que debe hacer en ese momento

Con la aprobación de la Comisión Hospitalaria de Investigación del Hospital Gómez Ulla, y cumpliendo con el RD 223/1988, de 14 de marzo, sobre protección de los animales utilizados para experimentación y otros fines científicos, el Dr. J. Antonio González-Nicolás investigó durante un año en un modelo animal, con protocolos estrictamente definidos y controlados. Se practicaron las correspondientes extracciones de sangre, se obtuvieron los concentrados de plaquetas, y estos se reinyectaron; y se realizaron los estudios histológicos procedentes.

Los resultados fueron determinantes:

1. La infiltración intradérmica de PRP en ausencia de lesión previa determinó un incremento de la proliferación fibroblástica
   
   
2. Se apreció un incremento de la síntesis de colágeno de los tipos III y IV, no cicatricial, y de los componentes de la sustancia fundamental
   
   
3. Los efectos anteriores pueden ser indicativos de una estimulación del proceso fisiológico de regeneración dérmica en ausencia de lesión previa. Es decir, regeneración (que significa tejido nuevo, idéntico al original, y funcional) que no reparación (que representa simplemente el desarrollo de una cicatriz).
   

Así las cosas, evaluamos las posibilidades reales de obtener un plasma rico en plaquetas (PRP), y a partir de él los factores de crecimiento (PRGF) que nos interesan.

Los requisitos fundamentales que pedimos a un sistema de obtención de PRP son:

1. Que pueda realizarse con pequeños volúmenes de sangre, es decir con extracciones equivalentes a las necesarias para una analítica compleja (20-30 cc)
   
   
2. Que permita incrementar las concentraciones basales de plaquetas (150.000-350.000 x mm3) al menos 3 ó 4 veces; y que este incremento sea sistemático y reproducible. Siendo que todos los estudios clínicos considerados apuntan que sólo a partir de esas concentraciones resulta significativamente aumentada la actividad (inducción de proliferación celular en cultivos) respecto de las concentraciones basales
   
   
3. Que asegure la viabilidad plaquetaria
   
   
4. Y que permita una constante relación entre el contaje de plaquetas y los niveles de factores de crecimiento obtenidos posteriormente

Aquí, como podía haber sido en cualquier otro apartado de este trabajo, hemos de referirnos a los trabajos del Dr. Eduardo Anitua (Vitoria - España), al que debemos considerar uno de los pioneros en el desarrollo de sistemas para la obtención de PRP, y en la utilización terapéutica de los factores de crecimiento. Como él, estimamos que, casi siempre, lo más simple es lo más eficaz, si se hace bien. Y hemos desarrollado un protocolo propio de extracción sanguínea cuidadosa y obtención de PRP, que consideramos idóneo y suficiente; lo describiremos más adelante.

Una vez obtenido el PRP, la cuestión fundamental será lograr la liberación completa y eficaz de los factores de crecimiento, y del resto de proteínas plaquetarias. Para ello será necesario reproducir el proceso natural de la coagulación que determina lo que se denomina desgranulación de las plaquetas, y que espontáneamente ocurre en caso de lesión del endotelio vascular.

Ahora vamos a considerar la obtención conveniente del plasma rico en plaquetas (PRP), en las condiciones que hemos establecido.

Según nuestro criterio, todo el proceso debe desarrollarse:

1. Mediante un método sencillo
2. Con instrumentación mínima
3. En poco tiempo (es decir, ante el propio paciente)
4. En el propio Centro Médico
5. Con seguridad y eficacia

Preconizamos una pequeña y cuidadosa extracción de sangre (no más de 20 cc), con anticoagulante ideal (citrato sódico al 3'8%) en la proporción de 9 a 1 (9 cc de sangre + 1 cc de citrato sódico). El citrato sódico es un quelante de los iones Ca (por eso impide la coagulación), pero no altera los receptores de membrana de la plaqueta, y eso determina la reversibilidad del proceso (al añadir Ca, en forma de cloruro).

Para la extracción sanguínea, aconsejamos el sistema Venosafe® de Terumo, porque:

a) basta 1 sola punción con palomita (Palomita Terumo MN-SVS21BQ18)

b) la extracción se produce por vacío en tubos colectores de 4'5 ml, que ya tienen incorporado el citrato sódico en la proporción exacta respecto de la cantidad exacta de sangre que será extraída por la acción del vacío (Tubo Terumo VT-050SBCS)

c) pueden obtenerse múltiples tubos (bastan cuatro tubos, pero por precaución es aconsejable obtener seis)

d) no se producen movimientos de la aguja (que supondrían molestias para el paciente y/o posibilidad de salida de vena)

e) la extracción puede ser "asistida" (a cuatro manos: p.e. las del médico y las de su auxiliar)

Habitualmente, para el procedimiento de bioestimulación cutánea en cara y cuello, son suficientes 4 tubos de 4'5 ml; si se precisa mayor cantidad de material terapéutico, se pueden obtener 6, 8, 10 ó más tubos (siempre una cifra par, lo cual permitirá equilibrar la centrífuga).

Ahora se procede a una centrifugación protocolizada; aquí reside uno de los elementos fundamentales de todo el procedimiento. Con la centrifugación se obtiene la separación (estricta, si el procedimiento se ha realizado adecuadamente) de las diferentes fracciones de la sangre. En el fondo del tubo se habrán concentrado los hematíes y, por encima, en abundante plasma estarán las plaquetas; en la zona intermedia, los leucocitos.

Si el procedimiento se ha realizado adecuadamente (debemos insistir en ello), la mayor concentración de plaquetas estará en la zona próxima a los hematíes; éste es el auténtico plasma rico en plaquetas (PRP) y es el que vamos a utilizar.

Las variables de la centrifugación son: por una parte, la velocidad y el tiempo, que las establece el médico; y por otra, el factor G, que es propio de cada centrífuga. La consideración de este factor G (que sólo el fabricante puede proporcionarnos) resulta fundamental para homologar un sistema de trabajo ideal.

Nosotros sólo trabajamos con las centrífugas Centro-4 de Selecta y Omnigrafter-I de Proteal; y nuestros protocolos sólo están validados para ellas. Centrifugamos, una sola vez, a 1500 rpm (revoluciones por minuto) durante 8 minutos. Y a temperatura ambiente (alrededor de 21-22ºC).

Aunque, por el momento, nosotros optamos por el procedimiento más simple, que es el que estamos describiendo, cabe referirse a la existencia en el mercado de equipos y materiales, más o menos sofisticados, pero en cualquier caso específicamente diseñados y algunos incluso homologados (FDA y/o CE) para la obtención de plasma rico en plaquetas y para su utilización clínica. He aquí la lista de los que conocemos:

- PRGF SYSTEM® de BTI
- SmartPReP 2® de HARVEST
- GPS System® de BIOMET
- PCCSII® de IMPLANT INNOVATIONS IBERICA
- PRP® de CURASAN
- SECQUIRE® de PPAI MEDICAL
- VIVOSTAT® de VIVOLUTION
- DISPRAS® ó MESOPRAS® de PROTEAL

Tras completarse el proceso de centrifugación se habrá producido la separación de las fracciones de la sangre, resultando la máxima concentración de plaquetas en la fracción plasmática inferior, la más cercana a la serie roja: al menos 3 ó 4 veces la concentración plasmática (en condiciones experimentales y con procesos más complejos, hasta 10 ó 12 veces). A esta fracción, que representa una tercera parte del total, se la considerará PRP (plasma rico en plaquetas). Y siempre teniendo en cuenta que, incluso dentro de la fracción PRP, la concentración plaquetaria desciende de forma espectacular conforme nos alejamos de la serie roja.

Las otras dos fracciones se considerarán PP (plasma con plaquetas) y PPP (plasma pobre en plaquetas).

Siempre deberá despreciarse aquel tubo en el que se observe un plasma no claro (tinción rojiza). Probablemente se habrá producido un defecto de manipulación o una hemólisis no deseada.


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